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細菌內毒素的檢測方法有哪些?

發(fā)布時間: 2022-07-21  點擊次數: 1280次

一、家兔檢測法

1923Seibert提出用家兔檢測熱原方法,1942年美國藥典首先將家兔法作為藥品的熱原檢查,為保障藥品質量和用藥安全發(fā)揮了重要作用。

 

目前,對于熱原的概念國內外仍未有*統(tǒng)一的認識。但綜合國內外文獻報道,普遍認為熱原的本質就是細菌內毒素的脂多糖。WHO 文件中同樣提到,藥品中的熱原就是指細菌內毒素,至少在藥檢范圍內控制內毒素就是控制熱原。嚴格地講,不是每一種熱原都具有脂多糖( lipoplysaccharide,LPS)的結構,在藥品生產質量管理規(guī)范條件下,藥品生產的質量控制一般可以接受的觀點是:不存在細菌內毒素意味著不存在熱原。多年來研究表明,熱原進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)后,并不直接引起發(fā)熱和其他毒性反應,但它可使細胞釋放內源性熱原物質。這種內源性熱原可直接作用于中樞神經系統(tǒng),刺激體溫中樞,引起機體發(fā)熱。

 

最早作為熱原檢測法的家兔檢測法也就成為人們檢測內毒素的最早方法。此方法即將一定量的被檢標本靜脈注入家兔體內,觀察其注射后的發(fā)熱情況,以決定所檢標本中有無熱原存在。

 

家兔檢測法為一種定性檢測內毒素的方法,應用歷史較久。但隨著社會的進步、科技的發(fā)展,制藥工業(yè)飛速前進,新藥品種不斷增加,臨床用藥要求越來越高,家兔法局限性日益突出。如家兔對內毒素在反應上有個體差異,敏感度不高,不能定量檢測內毒素等等,因此家兔檢測法現在已經很少使用。

二、GC/MS檢測方法

氣相色譜和質譜聯用法是上個世紀出現的一種內毒素檢測方法。此法主要依據細菌內毒素的主要毒性部分類脂A水解時產生一種3-羥基脂肪酸的物質。這種物質是內毒素所*的,并不存在于其他自然界的物質當中。每分子的類脂A含有4摩爾的3-羥基脂肪酸,類脂A的平均分子量為8000。通過對這種特異性3-羥基脂肪酸的檢測,可以定量檢測內毒素的含量。由于儀器的限制,氣質聯用的方法很難成為常規(guī)的細菌內毒素檢測方法。目前只應用于科研,對空氣的質量檢測等方面。

三、試劑檢測方法

我國藥典收載的細菌內毒素檢測方法為鱟試驗法,包括2種方法,即凝膠法和光度測定法,后者又包括濁度法和顯色基質法。當各種檢測法得到的檢測結果不一致時,以凝膠法的檢測結果為準。

 

 

鱟試驗法有定性和定量之分,其按試驗方法還可進一步分為凝膠法、動態(tài)濁度法、終點濁度法、動態(tài)顯色法和終點顯色法。

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